myPOLS Biotec正在開發(fā)新一代的DNA聚合酶

用于和可靠的應(yīng)用，例如個(gè)性化醫(yī)療，病原體檢測，DNA和RNA診斷，法醫(yī)學(xué)等等。

我們的研發(fā)活動(dòng)包括：

• 改進(jìn)的DNA聚合酶用于SNP檢測和甲基化特異性PCR。
• 病原體檢測分析，例如用于流感和諾如病毒診斷。
• 具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性的熱穩(wěn)定DNA聚合酶。
• 抑制劑抗性聚合酶，用于從樣品中直接PCR，如全血，唾液，細(xì)菌，細(xì)胞 - 顆粒，植物等。 

后但并非不重要：我們所有的酶和混合物都是在康斯坦茨內(nèi)部生產(chǎn)的，并經(jīng)過常規(guī)測試，符合高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

myPOLS Biotec是一家來自康斯坦茨大學(xué)的生物技術(shù)公司，來自Andreas Marx教授的研究小組。憑借我們在高通量DNA聚合酶設(shè)計(jì)方面的專業(yè)知識(shí)，我們?yōu)槟膽?yīng)用定制酶。

Volcano3G RT-PCR 2x Master Mix

包含所有必需的組分，包括dNTP和優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，可在所有標(biāo)準(zhǔn)PCR循環(huán)儀中實(shí)現(xiàn)成功可靠的實(shí)時(shí)qPCR和RT-qPCR。包含的酶由我們的*表現(xiàn)，熱啟動(dòng)配方，工程Taq DNA聚合酶和Volcano3G DNA聚合酶的混合物組成。該混合物被設(shè)計(jì)成適合多重PCR，病原體檢測qPCR和各種基于探針的DNA和RNA靶標(biāo)的qPCR。 

包含的Volcano3G DNA聚合酶是一種工程化的，極其熱穩(wěn)定的逆轉(zhuǎn)錄酶和組合的DNA聚合酶，通過定向的人工進(jìn)化獲得?；谶m體的DNA聚合酶的熱啟動(dòng)制劑防止錯(cuò)誤擴(kuò)增。高于50°-55°C的溫度會(huì)使適體的二級(jí)結(jié)構(gòu)熔化并使聚合酶釋放。 

 應(yīng)用

• 快速檢測和鑒定RNA和DNA靶標(biāo)
• 逆轉(zhuǎn)錄qPCRs（RT-qPCRs）
• qPCRs（DNA或RNA目標(biāo)）
• 多重PCR
• 實(shí)時(shí)PCR
• 基于探針的PCR
• 病原體檢測
• 入門擴(kuò)展 
• 終點(diǎn)PCR
• 篩選/高通量PCR
• SELEX

典型的RT-PCR方案

可以使用兩步法和三步法PCR方案。

* = Volcano3G DNA聚合酶允許直接來自RNA模板的“零步”RT-PCR（沒有等溫逆轉(zhuǎn)錄步驟），因?yàn)槟孓D(zhuǎn)錄也在循環(huán)PCR延伸步驟期間與DNA擴(kuò)增同時(shí)發(fā)生。因此，逆轉(zhuǎn)錄步驟是任選的，并且在某些情況下可以省略。

** =通過運(yùn)行溫度梯度理想地建立新的RT-PCR，以便找到每個(gè)引物對的*逆轉(zhuǎn)錄/退火/延伸溫度。引物的退火溫度受其核酸序列和反應(yīng)緩沖液組成（鹽和pH）的強(qiáng)烈影響。

通常，Volcano3G DNA聚合酶是*熱穩(wěn)定的，并且在55-95°C之間活躍。

反應(yīng)設(shè)置

使用的實(shí)驗(yàn)建議：

在退火/延伸步驟中使用溫度梯度進(jìn)行PCR，以找到測定的宜溫度。

大多數(shù)RT-PCR分析在短時(shí)間80℃（1分鐘）變性步驟和50-55℃（10分鐘）的逆轉(zhuǎn)錄步驟以及標(biāo)準(zhǔn)PCR循環(huán)條件下都能很好地起作用。

建議的反應(yīng)設(shè)置 

* =推薦的模板濃度在0.004ng /μl-0.1μg/μl（總RNA或基因組DNA）之間。

在使用前仔細(xì)旋轉(zhuǎn)并混合所有溶液。

質(zhì)量控制

RT-PCR活性：測試Volcano3G RT-PCR Mix的成功RT-PCR性能。在實(shí)時(shí)PCR循環(huán)儀中從人總RNA提取物擴(kuò)增151bp片段（HPRT1 mRNA），并將其顯示為單個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物。
DNA聚合酶活性：使用人工DNA模板和DNA引物監(jiān)測Volcano3G DNA聚合酶活性并將其調(diào)整為特定的DNA聚合酶活性。
酶濃度通過蛋白質(zhì)特異性染色確定。有關(guān)批次特定濃度，請通過info@mypols.de查詢更多信息。

存儲(chǔ)

本產(chǎn)品采用冷藏包裝。請?jiān)诘诌_(dá)-20°C時(shí)存放產(chǎn)品。
通過以等分試樣存儲(chǔ)來小化凍融循環(huán)的次數(shù)。對于日常使用，我們建議將等分試樣保持在4°C。

Volcano3G是否具有RNAse-H樣活性？

Volcano3G來自Taq DNA聚合酶，因此它沒有任何RNase-H活性。在循環(huán)PCR延伸步驟期間，逆轉(zhuǎn)錄與DNA擴(kuò)增同時(shí)發(fā)生。

然而，Volcano3G具有核酸酶結(jié)構(gòu)域作為Taq野生型酶，可用于基于水解的實(shí)時(shí)PCR。 

我怎樣才能將擴(kuò)增限制在mRNA靶標(biāo)上？

我只獲得引物二聚體。如何建立我的RT-PCR？

我可以用Volcano逆轉(zhuǎn)錄長RNA鏈（> 500 bp）嗎？

我在瓊脂糖凝膠上看到一個(gè)低分子帶 - 這是Volcano3G RT PCR Mix的污染嗎？

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